产品货号：
YT476
中文名称：
N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)
英文名称：
N-EGFP plasmid(with CMV promoter)
产品规格：
1μg|100μg
发货周期：
1～3天
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pCMV-N-EGFP是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein，增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| EGFP | 677-1393 |
| Multiple cloning site | 1394-1483 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1503-1524 |
| SV40 polyA signal | 1536-1919 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2057-2363 |
| bla promoter | 2388-2512 |
| SV40 promoter | 2532-2870 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF | 205-3696 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3697-4155 |
| pUC origin | 4284-4951 |
| 组分 | 1μg | 100μg |
| pCMV-N-EGFP | 1μg | 100μg |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃
pCMV-N-EGFP质粒(5003bp)的图谱如下：
pCMV-N-EGFP的多克隆位点的详细图谱如下：
1.pCMV-N-EGFP中没有的酶切位点包括：
| AclI | AflII | AhdI | AscI | AsiSI | BaeI | BbsI |
| BbvCI | BlpI | BmgBI | BsiWI | BsmBI | BspEI | BspQI |
| BssHII | BstEII | BstXI | BstZ17I | EarI | EcoNI | FseI |
| NotI | NruI | PflMI | PmeI | PmlI | PpuMI | PshAI |
| PspXI | SacII | SapI | SbfI | ScaI | SgrAI | SmaI |
| SwaI | TspMI | XcmI | XmaI | XmnI |
2.pCMV-Blank中的单酶切位点包括：
| NdeI | CA`TA,TG | 240 | ApaI | G,GGCC`C | 1454 | |
| SnaBI | TAC|GTA | 346 | PvuI | CG,AT`CG | 1534 | |
| CspCI | ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 380 | BclI | T`GATC,A | 1690 | |
| NheI | G`CTAG,C | 597 | MfeI | C`AATT,G | 1783 | |
| BmtI | G,CTAG`C | 597 | HpaI | GTT|AAC | 1796 | |
| Eco53kI | GAG|CTC | 653 | MluI | A`CGCG,T | 1919 | |
| SacI | G,AGCT`C | 651 | BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2080 | |
| AfeI | AGC|GCT | 660 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 2146 | |
| AgeI | A`CCGG,T | 664 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 2805 | |
| BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 765 | StuI | AGG|CCT | 2854 | |
| BsrGI | T`GTAC,A | 1386 | ClaI | AT`CG,AT | 2873 | |
| BamHI | G`GATC,C | 1394 | BspDI | AT`CG,AT | 2873 | |
| HindIII | A`AGCT,T | 1400 | EagI | C`GGCC,G | 2939 | |
| PstI | C,TGCA`G | 1406 | KasI | G`GCGC,C | 3032 | |
| EcoRI | G`AATT,C | 1412 | NarI | GG`CG,CC | 3033 | |
| EcoRV | GAT|ATC | 1420 | SfoI | GGC|GCC | 3034 | |
| SalI | G`TCGA,C | 1424 | PluTI | G,GCGC`C | 3032 | |
| AccI | GT`MK,AC | 1425 | MscI | TGG|CCA | 3115 | |
| BglII | A`GATC,T | 1430 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3151 | |
| BsoBI | C`YCGR,G | 1436 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3151 | |
| PaeR7I | C`TCGA,G | 1436 | BsrDI | GCAATG,NN` | 3264 | |
| AvaI | C`YCGR,G | 1436 | RsrII | CG`GWC,CG | 3549 | |
| XhoI | C`TCGA,G | 1436 | BstBI | TT`CG,AA | 3715 | |
| XbaI | T`CTAG,A | 1442 | BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 4022 | |
| SpeI | A`CTAG,T | 1448 | ApaLI | G`TGCA,C | 4637 | |
| PspOMI | G`GGCC,C | 1454 | PciI | A`CATG,T | 4951 |
pCMV-N-EGFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
N-EGFP primer (1284-1303):5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524):5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
pCMV-N-EGFP的全序列信息：
YT476 pCMV-N-EGFP全序列
pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果请参考下图：
图1.pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。
- 本质粒未经我公司书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 首次使用1μg包装的本制品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
- 100μg包装的本制品质粒浓度为0.1μg/μL，共1mL。可以直接用于酶切或者转染细胞。
- pCMV-N-EGFP质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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